Исследования «Дайго» НИИ Скорой помощи им. Н.В. Склифосовского

От пробиотиков к метабиотикам: эволюция развития

Т.С. Попова, Н.С. Тропская, Т.В. Черненькая, Е.А. Кислякова, И.Г. Шашкова ГБУЗ «НИИ скорой помощи им. Н.В. Склифосовского ДЗМ», Москва, Россия Контактная информация: Тамара Сергеевна Попова, д.м.н., профессор,заведующая научной лабораторией экспериментальной патологии НИИ скорой помощи им. Н.В. Склифосовского, Москва, Россия, e-mail: popova_nutr@mail.ru Дата поступления статьи: 17.08.2016

Нельзя повернуть время вспять, но можно отследить исторический путь!

  • Пробиотики, 1960 г. Вначале появились пробиотики. Врачи стали использовать живые, полезные для человека микроорганизмы, выращенные в лабораториях, чтобы решить проблемы с дисбактерозами. Идея была «подселить» в организм чужие полезные кишечные бактерии после того, как свои были уничтожены антибиотиками. Казалось, что новые «жители» подстроятся, со временем приживутся и так восстановится баланс микрофлоры.

Но спустя 20 лет, врачи и ученые убедились, что пробиотики не приживаются в организме! Наша иммунная система, работающая по принципу «свой-чужой», отвергает чужеродные микроорганизмы и выводит их в течение 5-7 дней.

  • Пребиотики, 1980 г. Если чужое не приживается, нужно усилить свое! Так появились пребиотики – «корм» для наших бактерий. Ведь если как следует накормить полезные бактерии, они станут сильнее и вытеснят вредные. Но выяснилось, что вместе с полезными бактериями пребиотики кормят и плохие!
    Проблема не решалась.
  • Синбиотики, 1990 г. Как сделать так, чтобы пробиотики оставались в организме как можно дольше? Возникла идея «кормить гостей» – соединить про-и пребиотики!

Казалось, что решение поставит точку в вопросе восстановления баланса микрофлоры кишечника, но..иммунная система все равно распознавала «чужаков» и беспощадно расправлялась с ними! Микрофлора у каждого уникальна и неповторима как видами бактерий, так их количеством 

Ученые продолжили исследования, которые привели к тому, что на свет появилось принципиально новое средство.

В экспериментах на крысах изучена эффективность экстракта брожения кисломолочных бактерий Дайго с целью профилактики и коррекции нарушений состава микрофлоры и изменений моторной активности тонкой кишки при дисбиозе. Экспериментальный дисбиоз, вызванный 7-дневным пероральным приемом противомикробных препаратов (амоксициклин+метронидазол), проявлялся существенными нарушениями в качественном и количественном составе микрофлоры тощей и слепой кишки. Профилактическое введение Дайго до введения противомикробных препаратов устраняло признаки дисбиоза.

Введение Дайго после моделирования дисбиоза приводило к восстановлению моторной функции кишечника, нормализации численности условно-патогенных микроорганизмов в тощей кишке и снижению содержания условно-патогенных микроорганизмов в слепой кишке.

Ключевые слова: экстракт брожения кисломолочных бактерий, микрофлора, моторная функция кишечника, экспериментальный дисбиоз.

Введение

Как известно, дисбактериоз кишечника – это синдром, сопутствующий многим патологическим состояниям и являющийся, в сущности, следствием патологического процесса. Среди многих причин возникновения дисбактериоза значимое место занимают нарушения микробиоценоза вследствие приема антибактериальных препаратов. Современные антибиотики являются основными средствами борьбы с инфекционными заболеваниями бактериальной природы. Часто вследствие их бесконтрольного использования отмечается гибель не только патогенных микроор-ганизмов в естественных биотопах, но и представителей нормальной микрофлоры человека.

Концепция функционального питания, впервые сформулированная в Японии в конце 1990-х годов, получила широкое признание в решении проблемы коррекции состояния микроэкологической системы человека, являясь в наиболее развитых странах мира одним из приоритет-ных направлений в профилактике и лечении большинства хронических заболеваний.

Функциональное питание объединяет продукты естественного или искусственного происхождения, которые предназначены для систематического ежедневного употребления и оказывают регулирующее действие на физиологические функции, биохимические реакции и психосоциальное поведение человека через нормализацию его микроэкологического статуса.

В последнее время очень часто вопросы функционального питания обсуждаются в контексте развития проблемы использования про-, пре- и синбиотиков . Это связано прежде всего с тем, что концепция функционального питания становится более направленной на специальные продукты, которые могут положительно влиять на состав кишечной микрофлоры. Так, при первом успешном опыте трансплантации тонкой кишки в НИИ СП им. Н.В. Склифосовского было продемонстрировано, что коррекция микрофлоры органов желудочно-кишечного тракта с помощью 2% раствора свекловичного пектина и пробиотиков привело к элиминации условно-патогенной флоры.

С апреля 2015 г. на российском рынке функциональных продуктов зарегистрирован и разрешен к применению японский продукт Дайго для поддержания микробиоценоза кишечника, усиления иммунитета, а также решения гастроэнтерологических проблем. В качестве активного ингре-диента Дайго содержит специально подобранный экстракт брожения 16 штаммов лактобактерий.

Дайго был разработан в качестве нового типа продуктов, производимых из кисломолочных бактерий, способствующих улучшению функционального состояния желудочно-кишечного тракта. В отличие от пробиотиков Дайго не содержит живых кисломолочных бактерий. Дайго представляет собой смесь пептидов – биорегуляторов, экстрагированных из бактериальных клеток 16 штаммов физиологических лактобактерий, колонизирующих кишечник здорового человека. Для получения соевого молока, используемого в качестве среды для культивирования кисло-молочных бактерий, применяются специальные соевые бобы, выращенные органическим путем без пестицидов и химикатов.

Экстракт кисломолочных бактерий является смесью секреторных продуктов и клеточных веществ кисломолоч-ных бактерий, полученных при их брожении. Исследования последних лет показали, что клеточные вещества и продукты брожения метаболизированных кисломолочных бактерий оказывают лучшее действие на кишечную регуляцию и жизненные функции, чем жизнеспособные кис-ломолочные бактерии.

Цель исследования – изучение эффективности функционального продукта Дайго в профилактике и коррекции состава микрофлоры и моторных нарушений тонкой кишки при экспериментальном дисбиозе у крыс.

Дизайн исследования

Исследования были проведены на 28 взрослых крысах самцах (масса тела – около 300 г, возраст – 4 месяца) линии Вистар.

Крысы были получены из питомника ООО «НеоМаркет». Все экспериментальные животные содержа-лись в стандартных условиях вивария НИИ СП им. Н.В. Склифосовского, получали воду и сбалансированный рацион питания (гранули-рованный корм, изготовленный по заказу ООО «Лабораторкорм») без ограничения. Световой режим – естественный.

Дизайн исследования

Все животные были разделены на 4 экспери-ментальные группы по 7 животных в каждой:

1. Контрольная группа – интактные животные (n = 7). У этих крыс была измерена эвакуаторная активность кишечника, а также взяты образцы содержимого тощей и слепой кишки для микро-биологического исследования.

2. Группа «Дисбиоз» – группа с эксперимен-тальным дисбиозом (n = 7). Крысам ежедневно однократно в течение 7 суток перорально вводили раствор противомикробных препаратов (амоксициклин+метронидазол). На 8-е сутки эксперимента у крыс была измерена эвакуаторная активность кишечника, а также взяты образцы содержимого тощей и слепой кишки для микробиологического исследования.
3. Группа «Дисбиоз+Дайго» – группа с экспериментальным дисбиозом и корригирующим введением тестируемого раствора Дайго (n = 7). Крысам ежедневно однократно в течение 7 суток перорально вводили раствор противомикробных препаратов (амоксициклин+метронидазол), а с 8- го по 21-й день – тестируемый раствор Дайго. На 22-е сутки эксперимента у крыс была измерена эвакуаторная активность кишечника, а также взяты образцы содержимого тощей и слепой кишки для микробиологического исследования.

4. Группа «Дайго+Дисбиоз» – группа с профилактическим введением тестируемого раствора Дайго и последующим введением противоми-кробных препаратов (амоксициклин+метронидазол) (n = 7). Крысам ежедневно однократно в течение 14 суток перорально вводили тестируе-мый раствор Дайго, затем с 15-го по 21-й день – раствор противомикробных препаратов. На 22-е сутки эксперимента у крыс была измерена эвакуаторная активность кишечника, а также взяты образцы содержимого тощей и слепой кишки для микробиологического исследования.

Дозы, схема и способ введения препаратов

Раствор Дайго вводили в количестве 0,33 мл/кг, амоксициклин – в дозе 28,5 мг/кг, метронидазол – в дозе 22,8 мг/кг.
Перед введением каждое животное взвешивали и производили расчет дозы препарата с учетом индивидуальной массы тела крысы.
Противомикробные препараты и исследуемый продукт Дайго вводили перорально, ежедневно с 9 до 11 часов утра.

Измерение эвакуаторной активности тонкой кишки

Измерение эвакуаторной активности тонкой кишки у экспериментальных животных производили с помощью инертного маркера Evans Blue. Для измерения эвакуаторной активности кишеч-ника крысам per os вводили маркер Evans Blue. Через 20 минут крыс усыпляли. На вскрытии выделяли тонкую кишку (от пилоруса до слепой кишки) и измеряли длину всей кишки и расстояние, которое прошел маркер за 20 минут. Индекс транзита – ИТ, выраженный в процентах, определяли как отношение расстояния, пройденного мар-кером, к общей длине кишки, умноженное на 100.

Сбор проб для бактериологического исследования

Для забора проб выделяли участок тощей кишки на расстоянии 15 см от связки Трейтца длиной 5 см. В стерильную пробирку специальной лопаточкой брали кишечное содержимое (для исследования полостной микрофлоры тощей кишки). Затем выделенный участок промывали стерильным физиологическим раствором, производили соскоб пристеночного слоя (для исследования пристеночной микрофлоры тощей кишки) и помещали пробу в стерильную пробирку. Далее выделяли слепую кишку. В стерильную пробирку специальной лопаточкой брали кишечное содер-жимое (для исследования полостной микрофлоры слепой кишки).

Бактериологические исследования Микробиологическое исследование кала и содержимого тощей и слепой кишки проводили в соответствии с нормативными документами, принятыми для исследования кала у людей: отраслевым стандартом 91500.11.0004-2003 “Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника”. Были изучены 9 групп микроор-ганизмов: Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Escherichia coli (E.coli), Proteus mirabilis, Klebsiella spp., неферментирующие грамотрицательные бактерии (НГОБ), Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp.
Данные предст